Вступление

Цель настоящего Руководства по дезинфицирующим средствам и методам стерилизации состоит в том, чтобы помочь персоналу лаборатории в принятии решений, касающихся разумного выбора и правильного использования определенных дезинфицирующих средств и методов стерилизации. Информацию о правильной утилизации всех дезинфицированных или стерилизованных отходов см. В руководстве для генераторов по обращению с опасными материалами и отходами.

Определения

Антисептика : процесс, включающий разрушение или подавление микроорганизмов в живой ткани, что ограничивает или предотвращает вредное воздействие инфекции.

Антисептик: как правило, антисептик - это химический агент, который наносится на живые ткани для уничтожения микробов. Обратите внимание, что не все дезинфицирующие средства являются антисептиками, потому что антисептик не должен быть настолько жестким, чтобы повредить живую ткань. Антисептики менее токсичны, чем дезинфицирующие средства, используемые на неодушевленных предметах. Из-за более низкой токсичности антисептики могут быть менее активными в разрушении нормальной и любой патогенной флоры.

Автоклав: автоклав - это устройство высокого давления, которое используется для подачи влажного тепла выше температуры кипения воды в нормальной атмосфере.

Биоцид: активные вещества и препараты, которые служат для отпугивания, обезвреживания или уничтожения химически или биологически вредных организмов.

Биоцид: вещество или химическое вещество, которое убивает биологические организмы.

Обеззараживание: уничтожение организмов или удаление загрязнений после использования, без количественных последствий, как правило, относится к процедурам обеспечения безопасности предметов перед утилизацией.

Дезинфицирующее средство: бактерицид, который инактивирует практически все признанные патогенные микроорганизмы, но не обязательно все микробные формы. Они не могут быть эффективными против бактериальных спор.

Дезинфекция: процедура лечения, которая устраняет многие или все патогенные микроорганизмы, за исключением бактериальных спор.

Гермицид: агент, который уничтожает микроорганизмы, особенно патогенные микроорганизмы.

Патогенный: микроб или другой организм, вызывающий заболевание.

Санитарная обработка: процесс снижения микробного загрязнения до приемлемого «безопасного» уровня. Процесс очистки предметов без необходимости проходить стерилизацию.

Стерилизация паром: автоклав, процесс стерилизации с использованием нагретого пара под давлением для уничтожения растительных микроорганизмов и непосредственно открытых спор. Обычная температура и давление для достижения эффективности - 121 ° C (250 ° F) при давлении 15 фунтов на квадратный дюйм при избыточном давлении в течение 15 минут. В особых случаях может потребоваться изменение температуры и давления пара.

Стерилизация: полное уничтожение или уничтожение всех форм жизни химическими или физическими средствами. Это абсолютный, а не относительный термин.

А. Дезинфицирующие средства

Информация, представленная в этом разделе, послужит общим руководством по выбору конкретного дезинфицирующего средства для использования с данным средством.

Лучший способ убедиться в пригодности дезинфицирующего средства по отношению к конкретному агенту - это попробовать этот агент с дезинфицирующим средством в рекомендованной производителем концентрации. Краткое описание способа действия каждого класса химических дезинфицирующих средств приведено ниже.

Хотя физические методы часто превосходят химическую дезинфекцию / стерилизацию, нецелесообразно автоклавировать или подвергать многие предметы воздействию высоких температур, особенно если предметы могут быть повреждены в результате многократного воздействия тепла. Обработка инертных поверхностей и термолабильных материалов может быть выполнена с использованием дезинфицирующих средств при условии, что учитываются следующие факторы:

• тип и уровень микробного загрязнения
• концентрация активного ингредиента
• продолжительность контакта между дезинфицирующим средством и предметом, подлежащим дезинфекции
• pH
• температура
• влажность
• наличие органических веществ или почвенная нагрузка

Взаимодействие этих факторов будет определять степень успеха при выполнении дезинфекции или стерилизации. В любых ситуациях просмотрите рекомендации производителя по правильному составлению и применению. Не пытайтесь использовать химическое дезинфицирующее средство для целей, для которых оно не предназначено.

Большинство дезинфицирующих средств, зарегистрированных Агентством по охране окружающей среды (EPA), имеют 10-минутную заявку на этикетку. Тем не менее, многочисленные исследователи продемонстрировали эффективность этих дезинфицирующих средств против вегетативных бактерий (например, Listeria, Escherichia coli, Salmonella, ванкомицин-резистентных энтерококков, метициллин-устойчивого Staphylococcus aureus), дрожжей (например, Candida), микобактерий (например, Mycobacterium tuberculosis) и вирусы (например, полиовирус) при времени воздействия 30–60 секунд. Федеральный закон требует соблюдения всех применимых инструкций на этикетках продуктов, зарегистрированных в EPA (например, разбавление при использовании, срок годности, хранение, совместимость материалов, безопасное использование и утилизация).

Зарегистрированные в EPA стерилизаторы, туберкулоциды и антимикробные препараты против определенных бактерий и вирусов общественного здравоохранения можно найти по адресу http://www.epa.gov/oppad001/chemregindex.htm.

1. Химические дезинфицирующие группы

а. Альдегиды: (формальдегид, параформальдегид, глутаральдегид)

Формальдегид - и его полимеризованный твердый параформальдегид обладают широким спектром биоцидной активности и эффективны для дезактивации поверхности и пространства. В качестве жидкости (концентрация 5%) формальдегид является эффективным жидким дезактиватором. Его биоцидное действие заключается в алкилировании карбоксильных, гидроксильных и сульфгидрильных групп на белках и кольцевых атомах азота пуриновых оснований. Недостатками формальдегида являются снижение эффективности при температуре охлаждения, его резкий, раздражающий запах и ряд проблем безопасности. Формальдегид в настоящее время считается канцерогеном или агентом, подозрительным на рак, согласно нескольким регулирующим органам. 8-часовой взвешенный по времени предел воздействия OSHA составляет 0,75 промилле.

Параформальдегид - это твердый полимер формальдегида. Параформальдегид образует газ формальдегид, когда он деполимеризуется при нагревании до 232-246 ° C (от 450 до 475 ° F); деполимеризованный материал вступает в реакцию с влагой воздуха с образованием газообразного формальдегида. Этот процесс используется для дезактивации больших разнесенных шкафов и шкафов биологической безопасности с ламинарным потоком, когда для работ по техническому обслуживанию или замены фильтра требуется доступ к герметичной части шкафа. Этап нейтрализации, нагревание карбоната аммония, требуется перед вентиляцией помещения. Формальдегидный газ может реагировать бурно или взрывоопасно (7,0 - 73% об. / Об. В воздухе), когда подвергается воздействию несовместимых веществ, поэтому только лицам, прошедшим специальную подготовку и получившим одобрение Департамента охраны окружающей среды и безопасности, разрешается использовать это газ.

Глутаральдегид - бесцветная жидкость с резким, резким запахом, характерным для всех альдегидов, с порогом запаха 0,04 частей на миллион (ppm). Он способен стерилизовать оборудование, хотя для осуществления стерилизации часто требуется многочасовое воздействие. Двухпроцентные растворы глютаральдегида проявляют очень хорошую активность против вегетативных бактерий, спор и вирусов. Он в десять раз эффективнее формальдегида и менее токсичен. Тем не менее, он должен быть ограничен и контролироваться из-за его токсических свойств и опасностей. Важно избегать контакта кожи с глутаральдегидом, так как это было зарегистрировано, чтобы вызвать сенсибилизацию кожи. Глутаральдегид также представляет опасность при вдыхании. Предельное значение верхнего предела NIOSH составляет 0,2 промилле.

Cidex, коммерчески приготовленный дезинфицирующий глютаральдегид, обычно используется для стерилизации холодной поверхности клинических инструментов. Глутаральдегидные дезинфицирующие средства всегда должны использоваться в соответствии с указаниями производителя.

б. Биоциды на основе галогенов: (соединения хлора и йодофоры)

1. Соединения хлора

Соединения хлора являются хорошими дезинфицирующими средствами на чистых поверхностях, но быстро инактивируются органическими веществами и, таким образом, снижают биоцидную активность. Они обладают широким спектром противомикробной активности и являются недорогими и быстродействующими. Гипохлориты, наиболее широко используемые из дезинфицирующих средств для хлора, доступны в жидкой (например, гипохлорит натрия), бытовой отбеливающей и твердой (например, гипохлорит кальция, дихлоризоцианурат натрия) формах. Бытовой отбеливатель имеет доступное содержание хлора 5,25%, или 52 500 частей на миллион. Из-за своей окислительной способности он быстро теряет потенцию и должен быть свежими используется в тот же день, когда он подготовлен. Свободные уровни содержания хлора в растворах гипохлорита как в открытых, так и в закрытых полиэтиленовых контейнерах снижаются до 40-50% от исходной концентрации в течение одного месяца при комнатной температуре.

При использовании растворов гипохлорита существует две потенциальные опасности профессионального облучения. Первым является производство канцерогенного бис-хлорметилового эфира, когда растворы гипохлорита вступают в контакт с формальдегидом. Второе - быстрое производство газообразного хлора, когда растворы гипохлорита смешиваются с кислотой. Следует также соблюдать осторожность при использовании дезинфицирующих средств на основе хлора, которые могут разъесть или повредить металлические, резиновые и другие чувствительные поверхности. Отбеленные изделия никогда не следует автоклавировать, не уменьшая отбеливатель тиосульфатом натрия или бисульфатом натрия.

Хлорамин Т, который получают из гипохлорита натрия и п-толуолсульфонамида, является более стабильной, не вызывающей запаха, менее агрессивной формой хлора, но имеет пониженную биоцидную активность по сравнению с отбеливателем.

2. Йодофоры

Йодофоры используются как антисептики и дезинфицирующие средства. Йодофор представляет собой комбинацию йода и солюбилизирующего агента или носителя; Полученный комплекс обеспечивает накопление йода с замедленным высвобождением и выделяет небольшое количество свободного йода в водном растворе. Антисептические йодофоры не подходят для использования в качестве дезинфицирующих средств с твердой поверхностью, потому что они содержат значительно меньше свободного йода, чем те, которые сформулированы в качестве дезинфицирующих средств.

Wescodyne , Betadyne , Povidone -Iodine и другие йодофоры являются коммерчески доступными дезинфицирующими средствами на основе йода, которые обеспечивают хороший контроль при соблюдении инструкций производителя по составлению и применению. Оба отбеливателя и йодофоры должны быть сделаны в холодной воде, чтобы предотвратить разрушение дезинфицирующего средства.

с. Соединения четвертичного аммония: (Зефирин, CDQ, A-3)

Соединения четвертичного аммония обычно не имеют запаха, не имеют цвета, не вызывают раздражения и дезодорации. У них также есть некоторое моющее действие, и они являются хорошими дезинфицирующими средствами. Однако активность некоторых соединений четвертичного аммония снижается в присутствии некоторых мыл или остатков мыла, моющих средств, кислот и тяжелых органических веществ. Как правило, они неэффективны против вирусов, спор и микобактерий туберкулеза . В основном эти соединения не подходят для любого типа терминальной дезинфекции.

Способ действия этих соединений заключается в инактивации производящих энергию ферментов, денатурации основных клеточных белков и разрушении клеточной мембраны. Многие из этих соединений лучше использовать в водяных банях, инкубаторах и других применениях, где галогенидные или фенольные остатки нежелательны.

д. Фенольные соединения: (соединения на основе O-фенофеноата)

Фенольные соединения являются производными фенола (карболовой кислоты). Эти биоциды действуют через повреждение мембран и эффективны против вирусов, пораженных оболочкой, риккетсий, грибков и вегетативных бактерий. Они также сохраняют большую активность в присутствии органического материала, чем другие дезинфицирующие средства. Крезолы, гексахлорфен, алкил- и хлорпроизводные и дифенилы более активны, чем сам фенол. Доступными коммерческими продуктами являются Lysol, Pine-Sol, Amphyl, O-syl, Tergisyl, Vesphene, L-Phase и Expose .

е. Кислоты / Щелочь:

Сильные минеральные кислоты и щелочи обладают дезинфицирующими свойствами, пропорциональными степени их диссоциации в растворе. Некоторые гидроксиды более эффективны, чем можно было бы предсказать из их значений. В целом кислоты лучше дезинфицируют, чем щелочи. Способ действия объясняется увеличением содержания H + и OH - в растворах, которые влияют на определенные микробные функции, однако общий эффект зависит не только от pH. Слабые органические кислоты более эффективны, чем неорганические кислоты, несмотря на низкие скорости диссоциации в растворе. Действие объясняется нарушением конформации ферментов и структурных белков на 2 ° и 3 °.

е. Тяжелые металлы:

Растворимые соли ртути, лактата серебра, хлорида ртути и хлорида ртути являются эффективными бактерицидными агентами. Нитрат серебра и хлорид ртути обычно используются в виде водных растворов 1: 1000. Действие заключается в атаке на белковые сульфгидрильные группы и нарушении ферментативных функций. Органическое вещество может обратить дезинфицирующие свойства ртути.

Предостережение. Перед использованием тяжелых металлов проконсультируйтесь с группой по опасным материалам EH & S, поскольку многие из них следует утилизировать как опасные отходы. В частности, удаление элементарной ртути и солей ртути является очень дорогостоящим.

г. Спирты:

Спирты действуют через разрушение клеточных мембран, солюбилизацию липидов и денатурацию белков, воздействуя непосредственно на функциональные группы SH. Этиловые и изопропиловые спирты являются двумя наиболее широко используемыми спиртами по их биоцидной активности. Эти спирты эффективны против липидсодержащих вирусов и широкого спектра видов бактерий, но неэффективны против спорообразующих бактерий. Они быстро испаряются, что затрудняет достижение увеличенного времени контакта, если предметы не погружены в воду.

Оптимальная бактерицидная концентрация для этанола и изопропанола находится в диапазоне от 60 до 90 об.%. Их цидная активность резко падает при разбавлении ниже 50% концентрации. Абсолютный алкоголь тоже не очень эффективен. Они используются для очистки инструментов и протирки внутренних помещений шкафов биологической безопасности, а также бутылок и т. Д. Для помещения в шкафы биологической безопасности. Спирты обычно считаются неагрессивными.

Б. стерилизация

1. Автоклав Steam:

Всегда консультируйтесь с производителем и / или руководством по эксплуатации автоклава для правильной температуры, давления и времени, потому что они могут отличаться от указанных в этом документе.

Только автоклавы, которые были зарегистрированы в EH & S, могут использоваться для дезинфекции патогенных или «подозрительных» инфекционных материалов. Каждый из этих автоклавов имеет белую наклейку «EH & S» с присвоенным номером. Вы должны связаться с EH & S, если хотите использовать автоклав, который ранее не был зарегистрирован, ему присвоен номер, и в течение 90 дней не было проведено тестирование спор, а в течение 6 месяцев было проведено техническое обслуживание.

Утилизация CU Биологического Управления лаборатории отходов Политик и процедура требует , чтобы , если автоклав используется для стерилизации патогенных культур или «подозрительных» инфекционных материалов, то коммерчески доступного Bacillus stearothermophilus или Bacillus Сенной вар. Тест-полоски Niger должны использоваться не реже одного раза в 90 дней для подтверждения и документирования эффективности уничтожения автоклава. Одна копия результатов теста должна быть размещена в автоклаве или рядом с ним, а другая копия отправлена ​​в EH & S, Кроме того, этот автоклав должен проверяться уполномоченным поставщиком услуг, по крайней мере, каждые 6 месяцев (предпочтительно каждые 60-90 дней) для обеспечения надлежащего функционирования, т.е. профилактического обслуживания, калибровки температуры и проверки адекватной дезинфекции (если лаборатория не выполняет Тест на бациллы). Один экземпляр текущего профилактического технического обслуживания записи должны быть размещены на или вблизи автоклава и еще один экземпляр направляется EH & S .

EH & S должен быть уведомлен, если какой-либо зарегистрированный EH & S автоклав был удален из обслуживания или не прошел ни тест на споры, ни техническое обслуживание. На автоклаве должен быть вывешен знак с надписью «Автоклав не работает». Не возобновляйте использование автоклава до тех пор, пока он не будет успешно отремонтирован, чтобы удовлетворить требования всех производителей для эффективной дезинфекции. Пожалуйста, сообщите EH & S об изменениях в автоклавах и / или их использовании.

Автоклавирование при температуре 121 ° C (250 ° F), при 15-20 фунт / кв.дюйм, является одним из наиболее удобных и эффективных средств стерилизации. Время измеряется после того, как температура стерилизуемого материала достигает 121ºC (250ºF). Необходимо следить за тем, чтобы пар мог циркулировать вокруг предметов, чтобы обеспечить равномерное распределение тепла. Успех стерилизации очень зависит от времени в жидких средах, при больших объемах требуются более длительные периоды времени для достижения эффективной температуры внутри самой среды. Кроме того, в грузе не должно быть пустых пространств, которые могли бы изолировать от пара - это условие может предотвратить передачу тепла сосудам, что не приведет к стерилизации содержимого.

При сухой загрузке небольшое количество воды должно быть включено в мешок автоклава, чтобы обеспечить достаточное содержание влаги в загрузке, чтобы обеспечить передачу и распределение тепла. Автоклавную ленту можно использовать для рутинных прогонов, когда перед использованием готовят стеклянную посуду или стерильную среду.

а. Химические индикаторы

1. Химические индикаторы изменения цвета

Химические индикаторы для автоклавирования с паром меняют цвет после воздействия в течение нескольких минут нормальной рабочей температуры в автоклаве 121ºC (250ºF). Следовательно, химические индикаторы могут дать быстрый визуальный ориентир для проникновения тепла внутрь автоклава. Химические индикаторы должны располагаться вблизи центра каждой загрузки и по направлению к нижней передней части автоклава.

Внимание: большинство химических индикаторов можно использовать только для проверки того, что ваш автоклав достиг нормальной рабочей температуры для дезактивации; у них нет временного фактора. Химические индикаторы сами по себе не предназначены для доказательства того, что организмы действительно погибают во время цикла дезактивации.

2. Индикаторы ленты

Индикаторы ленты представляют собой липкую бумажную ленту с термочувствительной маркировкой химических индикаторов. Обычно используемые термочувствительные маркировки включают диагональные полосы (автоклавная лента) и / или слово «стерильные». Эти маркировки появляются только в том случае, если лента подвергается в течение нескольких минут нормальной температуре дезактивации в автоклаве.

Внимание: Ленточные индикаторы могут использоваться только для проверки того, что ваш автоклав достиг нормальной рабочей температуры для дезактивации; у них нет временного фактора. Одни только ленточные индикаторы не предназначены для проверки того, что организмы действительно погибают во время цикла дезактивации.

б. Биологические показатели

Биологические индикаторы предназначены для демонстрации того, что автоклав способен убивать микроорганизмы. EH & S рекомендует использовать коммерчески доступные споры Bacillus stearothermophilus для контроля эффективности паровых автоклавов. Следуйте инструкциям производителя для испытания спор. Этот тест должен выполняться не реже одного раза в 90 дней. Всегда размещайте результаты теста в автоклаве или рядом с ним - Дата выполнения; Результат испытаний; Имя лица, проводящего тест.

2. Сухой жар:

Духовки, работающие при 160-170 ° С в течение 2-4 часов, эффективны для стерилизации стеклянной посуды или других непористых теплопроводящих материалов. Это неудовлетворительно для органических и неорганических материалов, которые могут действовать как изоляция, а также для термолабильных материалов. Сжигание является очень эффективным средством окончательной стерилизации и утилизации, а также используется для «точечной» стерилизации инокулирующих игл и петель, а также пламенной стеклянной посуды во время процедур микробиологического культивирования. Следует проявлять осторожность при горении «заряженных» предметов, так как эта практика может выделять инфекционные микроаэрозоли в результате разбрызгивания.

3. Излучение:

Ионизирующее излучение не используется для общей лабораторной стерилизации, однако ультрафиолетовое излучение (УФ) используется для борьбы с находящимися в воздухе микроорганизмами и дезактивации поверхности окружающей среды. Ультрафиолетовые источники используются в шкафах биологической безопасности для контроля частичного загрязнения и должны включаться только тогда, когда шкафы или корпуса не используются. Эта форма контроля чрезвычайно ограничена из-за ее низкой проникающей способности, восприимчивости к движению воздуха, необходимости в длительных периодах контакта и не была задокументирована как эффективный метод контроля.

Глаза и кожа не должны подвергаться воздействию прямого или сильно отражающего ультрафиолетового излучения. При работе в ультрафиолетовых лучах необходимо надевать соответствующую защиту для глаз и кожи. Следует надевать специальные защитные очки с боковыми щитками или защитные очки с твердыми боковыми частями. Защиту кожи обеспечивают защитные маски, кепки, перчатки, халаты и т. Д.

4. Пары и газы:

С практической точки зрения формальдегид, бета-пропиолактон и этиленоксид обычно не используются в лабораторной практике стерилизации. Эти стерилизаторы используются в больницах и коммерческих учреждениях, где для достижения стерилизации с использованием этих агентов требуются закрытые системы контроля температуры, влажности и концентрации.

Из перечисленных выше стерилизующих агентов этиленоксид (ETO) широко используется в качестве агента, действующего в качестве алкила, с очень широкой биоцидной активностью, включая споры и вирусы. Считается, что оксидное кольцо реагирует со свободными амино, сульфгидрильными и гидроксильными группами на белках. ETO легко воспламеняется и нуждается в инертирующем агенте при использовании в стерилизаторе. Это также токсичный, мутагенный и подозреваемый канцероген. Кроме того, бета-пропиолактон ведет себя аналогично ЭТО.

C. Полезные разбавления Wescodyne и обычного бытового отбеливателя

1. Стандартное  решение Wescodyne  :

2. Отбеливатели Решения:

1/100 разбавления 5,25% отбеливателя = 525 ч / млн 
1/10 разбавления 5,25% отбеливателя = 5250 ч / млн 
1,0 прямой 5,25% отбеливателя = 52 500 ч / млн 
1/8 разбавления 5,25% отбеливателя (раствор Дакина) = 562,5 ч / млн

D. Инактивация возбудителя болезни Крейтцфельда-Якобса (CJD)

Трансмиссивные губчатые энцефалопатии (TSE), также известные как прионные заболевания, являются смертельными дегенеративными заболеваниями головного мозга, которые встречаются у людей и некоторых видов животных. Они характеризуются микроскопическими вакуолями и отложением амилоидного (прионного) белка в сером веществе мозга. Все формы TSE являются экспериментально передаваемыми.

TSE человека встречаются в спорадической, семейной и приобретенной формах. Наиболее распространенная форма, спорадическая болезнь Крейтцфельда-Якоба (CJD), имеет во всем мире смертность около 1 случая на миллион человек в год и обычно поражает людей в возрасте от 55 до 75 лет. Единственным инфекционным агентом, который требует уникальных рекомендаций по дезактивации, является прион CJD и его новые варианты или субпопуляция прионов, vCJD. Инфекция зависит от тканей головного, спинного мозга и глаз, предположительно, с наибольшей инфекционностью. Эти прионы обладают необычной устойчивостью к обычным химическим и физическим методам дезактивации. Они недостаточно инактивируются большинством распространенных дезинфицирующих средств или большинством тканевых фиксаторов, и некоторая инфекционность может сохраняться при стандартных условиях автоклавирования (например, 121 ° C в течение 15 минут).

Было обнаружено, что следующие методы эффективны для инактивации прионов CJD и vCJD:

1. В качестве предпочтительного метода обработки загрязненного материала рекомендуется стерилизация паром в течение не менее 30 минут при температуре 132 ° C в стерилизаторе с гравитационным смещением.
2. Было установлено, что эффективный предварительный стерилизатор, используемый в течение 18 минут при температуре от 134 до 138 ° С.
3. Было обнаружено, что эффективными являются загрязненные предметы, такие как скальпели, иглы, хирургические инструменты и т. Д., Погружение в 1N гидроксид натрия на 1 час при комнатной температуре с последующей стерилизацией паром при 121 ° C на 30 минут.
4. Загрязненные поверхности (столешницы, полы) могут быть продезинфицированы отбеливателем (неразбавленным или с разведением до 1:10) или 1 н. Гидроксидом натрия при комнатной температуре в течение 15 минут или менее.
5. Загрязненные поверхности кожи промывают 1,0 н. NaOH или 10% отбеливателем в течение 2-3 минут с последующим промыванием большим количеством воды. Брызги для глаз или рта промывают большим количеством воды или физиологического раствора. В обоих случаях сообщите PI или руководителю лаборатории об инциденте, проконсультируйтесь с поставщиком медицинских услуг (например, в клиниках Wardenburg, WorkWell или Arbor Workman Compensation в зависимости от статуса занятости в университете), заполните форму отчета об инциденте в университете и вернитесь в Управление рисками.